尊龙凯时 RFL-6大鼠成纤维细胞培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞
生长特性：贴壁生长
冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM+10% FBS+1%双抗
传代方法：初次建议1:2传代
传代情况：每两天更换培养液。
备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便于进行过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

在收到细胞后，将其培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口，是运输细胞的最佳方法。务必在收到细胞后，喷洒75%酒精对细胞瓶进行消毒，随后在超净台上进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据，如不提供照片则默认为收到状态良好。请注意，放入培养箱时要放松瓶盖，传代后建议使用一瓶原瓶完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，收集瓶中的完全培养液至离心管内，留有5mL完全培养基备用于37℃、5% CO2的孵箱中培养。若细胞密度超过80%，则可进行传代，具体步骤如下：
1. 拨去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2mL，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，若大部分细胞变圆并逐渐脱落，迅速反应，轻敲培养瓶后加入5mL以上的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15mL离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，然后补充1-2mL完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），新补充完全培养基至5-8mL/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b、细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL，观察细胞变圆后，迅速加入5mL完全培养基终止消化，轻轻吹打以帮助细胞脱落，将悬液转移至15mL离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清后，将沉淀的细胞与1mL的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001）混匀，转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，则应先在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入液氮罐。

c、细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直到管内无结晶后，用75%酒精清洁管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含有5mL完全培养基的15mL离心管中，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清后，用5mL完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2的培养箱中继续培养；
4. 次日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

注意，有些细胞贴壁性不佳，在运输过程中容易出现脱落现象，这是正常的。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。对沉淀加入1-2mL胰酶轻轻吹打后，消化1-2分钟，终止反应并离心，补充1-2mL完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的重发条件及判定标准：
- 运输途中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损、培养液漏出等，均可重发；
- 细胞污染问题，需在24小时内提供真实实验结果，核实后可重发；
- 常温发货的细胞如静置24小时后，干冰运输细胞复苏后24小时若未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
- 细胞活性问题，请于7天内通过台盼蓝染色法鉴定并提供实验结果，核实后予以重发。

2）细胞问题不予重发的情况：
- 客户造成的污染或不当操作，非本库推荐的培养体系使用等，会导致细胞问题且不予重发。
- 在收到细胞的2天内未提出问题，则视为产品合格。

请遵循以上步骤和条款，确保您获得最高质量的细胞培养体验，选择尊龙凯时，让您的科研更有保障。