——基于尊龙凯时的南京赛泓瑞生物科技有限公司产品的技术方案与数据验证

1. 细胞构建与培养体系优化

HCT15/FU细胞株由人结直肠腺癌细胞HCT-15通过长期低剂量顺铂（Cisplatin）暴露诱导耐药性构建，具有稳定的耐药表型。其技术方案主要包括：

• 耐药诱导流程：采用梯度浓度递增法（初始浓度为0.5μM，逐步提升至5μM），结合间歇性药物刺激，持续培养6个月以上，筛选出具有稳定耐药性的细胞株。
• 培养基配置：使用RPMI-1640基础培养基，添加10%胎牛血清（FBS）、1%双抗（青霉素-链霉素）以及维持顺铂浓度（2μM），以确保耐药表型的稳定。
• 质量控制：通过STR鉴定确保细胞株的遗传一致性，支原体检测为阴性，冻存液采用无血清配方（90% FBS + 10% DMSO），并在液氮中长期保存。

2. 耐药性验证技术

IC50测定：采用CCK-8法测定顺铂对HCT15/FU的半数抑制浓度（IC50），结果显示耐药株的IC50为15.2μM，较亲本细胞（IC50为28μM）显著提升（*p<0.01）。

多药耐药基因分析：qPCR检测结果显示，耐药株中ABC转运蛋白家族（如ABCB1、ABCC1）及抗凋亡基因（Bcl-2）表达上调，符合临床耐药机制。

3. 案例研究

实验设计背景：为应对HCT15/FU的耐药性和化疗效果差的问题，开发聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）纳米颗粒负载顺铂（PLGA-Cis），评估其逆转耐药的效果。

• 实验分组：对照组为常规顺铂处理（5μM），实验组为PLGA-Cis处理（等效顺铂浓度5μM），空白组为无药物处理。

关键数据与结果

• 细胞活力：PLGA-Cis组的细胞存活率较对照组下降42%（*p<0.05），表明纳米载药系统增强了药物内吞效率。
• 凋亡率：通过Annexin V/PI双染法，实验组的凋亡率提升至58.3%，显著高于对照组的22.1%（*p<0.01）。
• 耐药基因表达：Western blot检测显示，PLGA-Cis处理后，ABCG2蛋白表达下调45%，Bcl-2下调60%，提示纳米药物可以靶向逆转耐药通路。

4. 技术优势与数据支持

实验全程使用尊龙凯时提供的HCT15/FU细胞株，其稳定的耐药表型为研究提供了可靠模型。同时，STR鉴定结果与文献报道一致（如D5S818位点：13；D13S317位点：8, 11），确保了实验的一致性。

5. 应用示范

• 抗肿瘤药物筛选平台：HCT15/FU细胞株适用于高通量筛选逆转耐药性的候选化合物。例如，南京赛泓瑞合作实验室利用该模型筛选出天然产物黄芩素（Baicalein），其与顺铂联用可降低IC50至68μM，协同指数（CI）为0.7819。
• 耐药机制研究：通过CRISPR-Cas9敲除ABCB1基因，以验证其在耐药性中的关键作用，数据显示，敲除后细胞对顺铂的敏感性提升32倍，为靶向治疗提供依据。
• 个性化治疗模型构建：结合患者来源异种移植（PDX）模型，HCT15/FU细胞可用于模拟临床耐药复发场景，以优化个体化用药方案。

针对耐药机制的研究，Wang等（2020）通过miRNA测序发现，HCT15/FU中miR-132-3p表达显著下调，靶向调控PI3K/AKT通路，为耐药干预提供新的靶点。

通过STR位点分析，HCT15/FU与临床结直肠癌样本的遗传特征高度匹配（如D18S51位点：11, 17），进一步支持了其在转化医学中的价值。

6. 结语

HCT15/FU人结直肠腺癌顺铂耐药细胞株是研究化疗耐药机制及开发新型疗法的理想模型。通过尊龙凯时的严格质量控制与技术支持，为科研与药物研发提供高效、可靠的解决方案。