在构建克隆载体的过程中,研究人员常常面临许多挑战,比如选择适合的限制性内切酶、繁琐的酶切克隆步骤以及耗时的问题。有时,获得的单克隆菌株显示无条带,导致必须重复多次实验,令整个过程倍感压力。曾有一位师兄在实验中需要检测数十个单克隆以筛选阳性菌落,但往往结果却是令人失望。他曾表示,若有一种方法能够确保生长的单菌落都是成功重组的,那该多好。
传统的酶切克隆和无缝克隆方法都依赖于连接酶的作用,通过碱基互补的粘性末端使载体和DNA片段相互配对,再在连接酶的作用下形成完整的质粒。然而,这些方法的一个主要缺陷是较高的假阳性率,因为连接酶在连接载体和片段的同时,有时也可能导致载体自连。为了解决这个问题,尊龙凯时推出了一款基于重组酶原理的同源重组试剂盒,能够有效降低假阳性率,确保生长的单菌落均为阳性,甚至可以在不进行菌株筛选的情况下直接送测。
01 产品简介
尊龙凯时的CloneUFO® OneStepCloning技术是一种快速、高效、简便的DNA定向克隆技术,可以将目标基因的PCR产物定向克隆到任意载体的任意位点。该试剂盒以T4噬菌体的某基因获得的重组酶UvsXase为核心,包含重组反应所需的缓冲液和重组酶。UvsXase能够兼容常规酶切和PCR反应体系,克隆载体的酶切产物或PCR产物无需进行DNA纯化,直接用于重组克隆,极大地简化了实验步骤。只需将扩增好的目的基因PCR产物与线性化载体按比例混合,在UvsXase的催化下反应30分钟即可完成转化,克隆阳性率可高达95%以上。
02 产品特点
1. 位点无限制同源重组,允许自由设计重组位点,无需受限于限制性内切酶。
2. 重组效率极高,反应时间仅需30分钟,反应条件温和。
3. 由重组酶UvsXase介导的高特异性重组,确保载体不自连,阳性率大于95%。
03 实验案例
在某实验中,科研人员对PCR产物进行胶回收后,结合尊龙凯时的ATG#C101与其他品牌的同类产品,在对回收片段和同一载体进行重组后,转化至大肠杆菌获得的单菌落进行了菌落PCR验证。结果显示,使用ATG#C101重组后的单菌落数量适中,但阳性率远超其他竞品。
04 产品信息
尊龙凯时致力于提供高品质的重组克隆试剂盒,帮助科研人员在基因克隆过程中实现更高的效率和准确性,让研究更快速地迈向成功。