操作步骤如下：

步骤 1: 细胞浸洗

在培养板中，将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗三次，每次持续3分钟，以确保细胞表面的杂质得到清除。

步骤 2: 固定细胞

接下来，用4%的多聚甲醛固定爬片15分钟，再用PBS清洗玻片三次，每次3分钟。

步骤 3: 透化处理

使用5% Triton X-100（PBS溶液配制）在室温下处理20分钟。这一步骤对于那些细胞膜上表达抗原的情况可省略。

步骤 4: 血清封闭

使用PBS浸洗玻片三次，每次3分钟后，吸干PBS，向玻片上滴加正常山羊血清（前提是二抗来源是山羊），在室温下封闭30分钟。

步骤 5: 加入一抗

用吸水纸吸去封闭液，但无需洗涤，每张玻片滴加适量稀释过的一抗，并放入湿盒，在4℃条件下过夜孵育。

步骤 6: 加入荧光二抗

用PBST浸洗爬片三次，每次3分钟，吸干多余液体后，滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒内于20-37℃环境中孵育1小时，随后使用PBST再浸洗3次，每次3分钟。注意，从此步骤起，后续操作需在较暗环境中进行，以保护荧光信号。

步骤 7: 再次血清封闭

使用吸水纸吸干液体，向玻片上滴加正常山羊血清，室温下封闭30分钟（前提是二抗来源仍是山羊）。

步骤 8: 添加第二种一抗

用吸水纸去掉封闭液，滴加稀释好的第二种一抗，并在4℃湿盒中避光孵育过夜。注意：第二种一抗的种属须与第一种不同，例如，可以选用小鼠和兔子的抗体。

步骤 9: 添加第二种荧光二抗

采用PBST浸洗爬片三次，每次3分钟，随后吸干多余液体后滴加稀释好的荧光二抗，在湿盒中保持20-37℃孵育1小时，并再用PBST浸洗切片三次，每次3分钟。需要留意的是，若第一种抗体为红色荧光，则第二种需选择其他颜色的荧光。

步骤 10: 核染色

添加DAPI进行核染色，避光孵育5分钟，随后使用PBST洗去多余的DAPI，重复洗涤4次，每次5分钟。

步骤 11: 封片观察

最后，用吸水纸吸干爬片上的液体，使用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，并在荧光显微镜下观察及采集图像，确保研究结果的准确性与可靠性。

品名尺寸处理灭菌规格：

• J060016: 24mm圆形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J120011: 20mm圆形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J240012: 14mm圆形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J480014: 8mm圆形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J960019: 3mm圆形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J060036: 24*24mm方形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J120031: 14*14mm方形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J240032: 10*10mm方形爬片，TC处理，伽马射线灭菌，100片/盒，10盒/箱
• J060026: 24mm圆形多聚赖氨酸包被爬片，伽马射线灭菌，20片/盒，10盒/箱
• J120021: 20mm圆形多聚赖氨酸包被爬片，伽马射线灭菌，20片/盒，10盒/箱
• J240022: 14mm圆形多聚赖氨酸包被爬片，伽马射线灭菌，20片/盒，10盒/箱

注：公司提供定制服务，可根据需求打造任何规格的细胞爬片，确保您在生物医疗领域的实验研究中，能依靠尊龙凯时的高品质产品，获得理想的实验结果。