尊龙凯时致力于为生物科研领域提供优质的细胞培养解决方案。以下是细胞培养的详细步骤及注意事项，确保您的细胞在实验过程中的健康生长与繁殖。

培养条件

使用1640培养基，加入10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素-链霉素（PS），无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，培养温度均设定为37℃，在5% CO₂环境下培养。

传代方法

- **第一次传代建议**：1:2的比例进行传代； - **传代情况**：每两天更换培养液，以保持细胞健康。

细胞处理步骤

收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶外壁进行消毒，并在超净工作台内进行操作。细胞接收到后，请在37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长状态，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x、100x、200x各一张），前三天的照片是售后服务的重要依据，未提供照片默认为状态良好。

细胞传代步骤

贴壁细胞传代

1. 去除培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。 2. 加入0.25%的胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大多变圆并脱落，添加5ml完全培养基结束消化。 3. 将细胞悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中。 4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml每瓶，放入37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。

悬浮细胞传代

半换液处理：将培养瓶竖立在培养箱内静置1小时，轻轻吸取3ml培养基，补充3ml完全培养基。 如果细胞培养基变色缓慢，可以直接加入500μl FBS。分瓶时，可以直接补充5ml培养基进行培养，通常这样传代三次后可离心处理一次，去掉死细胞。 离心换液法：将细胞悬液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，重悬后按1：2的比例分到新T25瓶中，以保持细胞的生长活力。

细胞冻存与复苏

冻存细胞时，细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，将培养液弃去，用PBS清洗细胞一次。添加0.25%的胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化。 将细胞沉淀后加入1ml无血清冻存液，混匀后装入冻存管，最后放入-80℃冰箱中存放24小时，再转入液氮罐中保存。

注意事项

在运输过程中，细胞的贴壁情况有可能受到影响，会发生脱落现象，这是正常的。如细胞脱落较多，请将所有培养液收集至离心管，通过离心去掉死细胞，重悬后进行传代。 尊龙凯时建议用户严格遵循操作规程，以确保细胞的健康生长和实验的顺利进行。